Серологическое исследование ифа

Сайт предоставляет справочную информацию исключительно для ознакомления. Диагностику и лечение заболеваний нужно проходить под наблюдением специалиста. У всех препаратов имеются противопоказания. Консультация специалиста обязательна!

Серологический анализ крови представляет собой способ лабораторного исследования определенных антигенов или антител (специфических белков) в сыворотке крови пациента, основанный на иммунных реакциях организма. Данный метод применяется при диагностике инфекционных заболеваний для выявления наличия антител в крови больного к определенному виду вирусов или бактерий, а также для определения групповой принадлежности крови.

Исследуемый материал

Методика проведения анализа или забора крови

Данный анализ не требует специальной подготовки пациента. Забор крови проводится утром натощак и, производится в процедурных кабинетах лечебных учреждений, согласно общепринятым гематологическим методикам. Для серологического исследования забор крови производится двумя методами: венозную кровь забирают из локтевой вены пациента, а капиллярную кровь – из безымянного пальца. Кровь помещают в стерильные герметичные пробирки.

Особенности транспортировки крови и хранения сыворотки

Для чего используют серологические исследования?

Серологические методы лабораторной диагностики используются для выявления таких заболеваний как эхинококкоз, трихинеллёз, токсокароз, описторхоз, цистицеркоз, токсоплазмоз, амебиаз, лямблиоз, для определения эффективности проведённого курса лечения и, наконец, для обнаружения повторного заболевания после полного выздоровления пациента.

Основные методы серологической диагностики

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ)

Данная реакция является непрямым вариантом серологического исследования, то есть, производится она в два этапа. На первом этапе производят выявление необходимого антитела в циркулирующем комплексе антиген – антитело с помощью антиглобулина, схожего по своей структуре с белками иммунной сыворотки. Выявление искомого антитела возможно также при изучении заранее приготовленного антигенного препарата под люминесцентным микроскопом, без использования антиглобулинов.

Иммунофлюоресцентная реакция – очень трудоёмкий процесс, требующий от специалиста немало времени и ответственности. Начинается реакция с подготовки растворов, затем сыворотки и их контрольные образцы подвергаются титрованию (процесс, позволяющий определить содержание определённого вещества путём постепенного смешивания исследуемого раствора с контролируемым количеством реагента). Подготовленные ранее разведения и их контрольные образцы аккуратно наносятся на предметные стёкла с антигеном. Потом препараты подвергаются инкубации, затем следует их отмывание и высушивание на воздухе. На стёкла с антигеном тонким слоем наносится антисыворотка, после этого производится вторичная инкубация препаратов и, вся предыдущая цепь действий повторяется, завершаясь высушиванием препарата. В результате препарат на предметном стекле подвергается обработке глицерином и исследуется в люминесцентном микроскопе.

Результаты проведённой реакции оцениваются по четырёх бальной шкале, которая характеризуется интенсивностью поверхностного жёлто-зелёного свечения клеток антигенов:
+ очень слабое свечение клетки, заметное только на её периферии
++ слабое свечение периферии клетки, но с явно заметным зелёным оттенком
+++/++++ яркое свечение зелёного цвета периферии клетки
Титром реакции считается такое разведение сыворотки, где не менее 50 % клеток антигена проявляют чёткое поверхностное свечение, то есть результат реакции +++ или ++++. Значение тира реакции от 1/80 до 1/100.

Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА)

Интенсивность реакции зависит от количества осаждённых эритроцитов на дне образованных лунок:
отрицательная реакция, которая характеризуется осаждением эритроцитов на дно лунок в виде небольшого колечка с гладкими краями или «пуговки»
+ слабая интенсивность, для данной реакции характерны небольшие одиночные отложения на дне лунки. Неагглютинированные эритроциты образовывают «маленькое колечко» в центре лунки
++ средняя интенсивность, ей свойственно образование на дне лунки «широкого плотного кольца» из неагглютинированных эритроцитов
+++ интенсивная реакция, агглютинированные эритроциты образуют так называемые «зонтики», в центре которых, явно видны кольца, образованные осевшими неагглютинированными эритроцитами
++++ резко интенсивная реакция, в которой агглютинируются все эритроциты и, образуя «зонтики», выстилают дно лунок.
Титром данной реакции считают последнее разведение сыворотки, при котором выявляется явная агглютинация эритроцитов не менее +++, то есть при интенсивной или резко интенсивной реакции.

Читайте также:  Может ли гинеколог

Иммуноферментный анализ (ИФА)

Принцип метода заключается в своеобразном взаимодействии антитела с антигеном. Одним из обязательных условий реакции является предварительная фиксация одного из её компонентов, то есть антигена или антитела, на твёрдых планшетах. Затем, при помощи ферментной метки обнаруживают возникнувшие комплексы антиген – антитело благодаря изменению оптической плотности первоначальной смеси (субстрата), что проявляется изменением интенсивности её окраски. ИФА свойственны некоторые преимущества перед остальными серологическими методами, например, данная реакция является наиболее чувствительной, в тестах используются универсальные реагенты, остающиеся стабильными не менее 6 месяцев, автоматизированный процесс учёта результатов реакции. Набор, необходимый для проведения реакции, содержит следующие компоненты: паразитарный антиген, специфические сывороточные антитела, конъюгат, планшета с зафиксированным на ней специфическим паразитарным антигеном, контрольные сыворотки.

Постановка реакции ИФА происходит в несколько этапов: вначале производится приготовление необходимых растворов, затем готовятся исследуемые образцы сывороток, а также контрольные сыворотки, позже следует нанесение приготовленных образцов сыворотки и контрольных сывороток на твёрдофазные носители, планшеты инкубируются, промываются и, только после проведённых процедур в лунки планшет вносится конъюгат. Через некоторое время он удаляется путём промывания лунок. На завершающем этапе в лунки вносится субстратная смесь и выдерживается в тёмном месте при комнатной температуре. Оценка результатов проводится автоматически при помощи специальных измерительных приборов, в некоторых случаях допускается визуальный учёт результатов проведённой реакции.

Достоверность и качество методов серологической диагностики зависят от организации проведённого внутреннего и внешнего лабораторного контроля, состоящих из нескольких независимых процедур, предназначенных для оценки качества результатов проведённого анализа.

Что такое серологическое исследование крови?

Серологическое исследование (СИ) основано на способности антигенов и антител связываться друг с другом. СИ позволяет с точностью выявить наличие у пациента определённого вируса либо бактерии, группу крови и резус, реактивность организма к антибиотикам, аутоиммунные заболевания, гормональные нарушения, индивидуальную специфичность белков, определить эффективность терапии.

Система иммунитета борется с проникающими в организм болезнетворными микробами (антигенами) при помощи антител, при этом создавая к каждому из вирусов, паразитов либо бактерий свой определённый тип защиты.

Способность иммунитета вырабатывать особые вещества, нейтрализующие вредоносные частицы, была известна учёным давно. Но увидеть реакцию антиген-антитело в лабораторных условиях удалось только в конце XIX века. Было обнаружено, что в результате образования связки, комплексы выпадают в осадок, образуя хлопья либо помутнение. Такие реакции получили названия агглютинации и преципитации. В XX веке серология — наука о свойствах сыворотки, стремительно развивалась, обнаруживались новые методы диагностирования на основе реакций антиген-антитело. На сегодняшний день существует множество способов выявления иммунных комплексов, а СИ являются незаменимым звеном в диагностике, лечении, создании новых медицинских препаратов и вакцин.

Показания к проведению анализа.

Серологические исследования сопровождают современного человека на протяжении всей жизни. Первые анализы на выявление определённых антител проводятся, когда малыш находится ещё в утробе. Беременная женщина сдаёт кровь на различные СИ для определения возможного резус-конфликта либо инфекций, способных навредить вынашиваемому плоду. Когда ребёнок появляется на свет, его ожидают серологические исследования, позволяющие диагностировать врождённые заболевания. Впоследствии анализы сдаются по следующим причинам:

  • вирусные, бактериальные, паразитарные инфекции;
  • выявление активности, стадии развития болезни;
  • гормональные патологии;
  • бесплодие;
  • аутоиммунные заболевания;
  • нарушение обмена веществ;
  • аллергии;
  • онкологические заболевания;
  • планирование беременности, период вынашивания, патологии беременных;
  • выявление ревматоидного фактора;
  • определение группы крови и резус-фактора;
  • эффективность терапии при различных болезнях;
  • эффективность вакцинации;
  • предоперационный и постоперационный период при необходимости оценки уровня некоторых антител;
  • изучение иммунного состояния организма.

Подготовка к исследованию.

Так как серологические исследования охватывают широкий спектр анализов, в каждом конкретном случае может понадобиться определённая подготовка, но существуют общие правила сдачи серологического теста:

  • За сутки до исследования следует ограничить в рационе жирное и жареное, исключить алкоголь.
  • Последний приём пищи должен завершиться за 10 — 12 часов до анализа.
  • В день сдачи крови не следует употреблять кофе, чай либо иные напитки. Можно в небольшом количестве пить чистую воду.
  • Лекарственные средства перед анализом исключаются. Если приём отменить невозможно, необходимо предоставить врачу полный перечень препаратов, в том числе витаминов, пероральных контрацептивов.
  • Все другие исследования либо медицинские манипуляции проводятся после СИ.
  • Курение рекомендуется прекратить за 12 часов до взятия образца крови.
  • В предыдущий день следует избегать физических и эмоциональных нагрузок, а перед исследованием желательно 15 минут посидеть в полном покое.
  • СИ назначаются на утреннее время и сдаются натощак.
Читайте также:  Таблетки для повышения потенции с алкоголем

Методы проведения серологического исследования.

Все методики определения комплексов антиген-антитело (Аг-Ат) основываются на использовании известного Аг либо Ат в поиске неизвестного. Если необходимо обнаружить Аг, необходимы диагностические иммунные сыворотки с содержанием специфических Ат. Если целью СИ является выявление Ат, используются диагностикумы — взвеси, содержащие определённые Аг.

Серологические анализы могут отражать качественный либо количественный результат. При качественном исследовании итог может быть отрицательный или положительный, то есть искомый элемент либо обнаружен, либо нет. Количественный итог выражается в виде числового значения либо знаками «+» (обычно от одного до четырёх).

Методы серологических исследований:

  • Агглютинация. Связывание Ат с Аг с последующим формированием хлопьев либо осадка. Применяются прямые, непрямые, развёрнутые, ориентировочные реакции, позволяющие выявить антитела в сыворотке.
  • Гемагглютинация. Используются эритроциты с адсорбированными на них Аг либо Ат, которые склеиваются с соответствующими Ат и Аг. Образуемые комплексы выпадают в виде фестонного осадка.
  • Преципитация. Образование комплекса Аг-Ат с последующим осаждением в виде помутнения, именуемого преципитатом.
  • Коагглютинация. Выявление Аг при помощи Ат, адсорбированных на белке клеток стафилококка.
  • Торможение гемагглютинации. Ат иммунной сыворотки подавляют вирусные Аг, в итоге вирусы теряют способность склеиваться с эритроцитами.
  • Непрямая реакция Кумбса. Определяются Ат к поверхностным Аг эритроцитов.
  • Кольцепреципитация. Проводится на основе иммунной сыворотки с наслоением растворимого Аг.
  • Двойная радиальная иммунодиффузия. Реакция основана на диффундировании компонентов антисыворотки и Аг в лунках агара либо агарозы.
  • Реакция связывания комплемента. Связь Аг и Ат сопровождается адсорбцией комплемента, в качестве индикатора используются эритроциты барана и Ат к ним в составе гемолитической сыворотки.
  • Нейтрализация. Основана на нейтрализации вирусного агента антителами.
  • Реакции, основанные на маркировании Ат и Аг флуоресцентным либо ферментным составом — иммунофлюорисцентный (РИФ) и иммуноферментный (ИФА) методы.

Иммунофлюорисцентный метод.

Данный метод основан на использовании Ат, меченных флуоресцентным веществом. Чаще всего в качестве метки используется флуоресцеинизотиоционат, обладающий зелёным свечением в лучах ультрафиолета. Результат анализа оценивается по степени яркости свечения. Может быть использован ручной метод определения при помощи люминесцентного микроскопа, оптического микроскопа с люминесцентной насадкой, а также автоматический способ с применением микрочипового цитомера, проточного цитомера либо роботизированного флуоресцентного микроскопа.

РИФ проводится прямым и непрямым методом. Прямой способ означает непосредственное связывание сорбированного Аг с меченым Ат. Непрямой метод подразумевает использование немаркированных Ат для связки с Аг, а затем добавление меченых Ат, что позволяет избежать неспецифических реакций.

Иммуноферментный анализ.

ИФА основан на выявлении комплексов Аг-Ат при помощи маркирования одного из компонентов. В качестве метки используются различные ферменты, которые в результате ферментативной реакции образуют окрашивание. Существуют разнообразные методы ИФА, их можно классифицировать как гомогенные и гетерогенные методы.

Гомогенные означают, что все этапы реакции происходят в растворе.

Гетерогенные методы включают разделение на фазы с использованием твёрдого носителя.

Гомогенно-гетерогенные способы основываются на том, что комплексы Аг-Ат формируются в растворе, а затем для разделения используется твёрдая фаза.

Существует множество вариаций методов ИФА, некоторые из них представлены ниже.

  1. Сэндвич-метод. К иммобилизованным Ат добавляется раствор с Аг, после образования комплексов носитель отмывают от лишних компонентов и добавляют маркированные Ат. В результате, Аг оказываются зажатыми иммобилизованными и мечеными Ат, откуда и произошло название метода.
  2. Неконкурентный непрямой ИФА. К иммобилизованным Аг присоединяют исследуемую сыворотку с Ат. Когда образуются комплексы, лишние Ат смывают и добавляют маркированные Ат, способные связаться с прикреплёнными к поверхностям лунок иммунными комплексами.
  3. Конкурентный прямой ИФА. К иммобилизованным Аг вносят исследуемую сыворотку и конъюгат, содержащий маркированные Ат. Формируются комплексы Аг-Ат нескольких видов: с мечеными Ат и с немаркированными Ат, которые вступают между собой в конкуренцию за связь с Аг.

Какие инфекции помогает выявить серологическое исследование.

Если у пациента присутствует определённая симптоматика либо иные исследования указывают на заболевание, назначается серологический анализ.

Серологические исследования используют для диагностики следующих инфекций:

  • вирус гепатита А, В, С, D, Е;
  • сифилис;
  • ВИЧ;
  • герпес;
  • цитомегаловирус;
  • краснуха;
  • корь;
  • паротит;
  • Эпштейн-Барр;
  • хеликобактер;
  • хламидии;
  • микоплазмы;
  • токсоплазмы;
  • лямблии;
  • гельминты;
  • уреаплазмы;
  • парвовирус;
  • вирус ветряной оспы;
  • вирус клещевого энцефалита;
  • вирус Денге;
  • коклюш;
  • боррелии;
  • легионеллы.
Читайте также:  Миома матки на узи

Преимущества серологического метода исследования в диагностике инфекций.

  1. Высокая чувствительность и специфичность.
  2. Широкий спектр определяемых инфекций.
  3. Ранняя диагностика инфицирования.
  4. Возможность мониторинга развития заболевания.
  5. Быстрота и удобство в исполнении.
  6. Возможность использования минимального объёма исследуемого материала.
  7. Безопасность исследования.

Болезнь Крона, диагностика, диета, лечение

Серодиагностика приобретает огромное значение в определении и лечении заболеваний. Этот метод позволяет определить изменение титра антител в крови пациента на протяжении всей болезни. Серологическая реакция идет между антителами сыворотки крови пациента и известным антигеном. Серодиагностика может использоваться для определения всех типов возбудителей (и бактерий, и протистов, и вирусов).

На болезнетворный агент (антиген) в организме человека вырабатывается особое защитное соединение (антитело). Выработка антител – это своеобразная защитная реакция организма, которая впоследствии позволит ему эффективнее защищаться от чужеродных белков (антигенов).

Иммуноферментный анализ (ИФА)

Чаще всего серодиагностика проводится методом иммуноферментного анализа (ИФА). Что это за тест? Это обычная реакция на выявление связи антиген-антитело. Но для выявления этого комплекса используют фермент, сигнализирующий о наличии соединения. ИФА используется не только для диагностики инфекционных заболеваний. С помощью этой методики можно определять онкомаркеры, гормоны и аллергены.

ИФА позволяет определять три типа антител: иммуноглобулин А, М, G. По наличию определенного типа иммуноглобулинов можно судить о стадии заболевания. Например, если ИФА выявил только IgA, это говорит о начальной стадии заболевания. На 2-4 неделе болезни появляются Ig типа М. И только через месяц появляются все типы, учитывая IgG. После выздоровления в организме остается метка об инфекции. Это IgG (иногда и IgA), при этом титр их сильно снижается. На основе этих данных выставляется диагноз, отслеживается динамика болезни и ответ организма на проводимое лечение.

ПРИМЕНЕНИЕ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА

В клинике ИФА широко применяют для определения возбудителей вирусных гепатитов, ВИЧ-инфекции, сифилиса, хламидий и паразитов. Спектр возможностей исследования неограничен. Диагностика инфекций этим методом имеет ряд достоинств и недостатков. Поговорим о них подробнее.

ИФА позволяет выявить болезнь на ранней стадии. Например, при диагностике Лайм-боррелиоза антитела образуются через месяц после инфицирования, а клиническая картина может развиться спустя месяцы и годы.

ИФА дает высокую точность. Выявить комплекс «антиген-антитело» удается в 90% случаев.

ИФА остается довольно простым и дешевым методом исследования. Примерная цена услуги зависит от вида анализа и варьируется в пределах 300-700 рублей. Немного дороже обойдется количественный анализ – 600-1300 рублей.

ИФА за счет своей простоты и дешевизны часто используется как метод скрининга. С его помощью удается вычислить переносчиков заболеваний среди обширной популяции.

ИФА проводится довольно быстро, ответ не заставит себя ждать.

Внимание! Расшифровка метода проводится врачом. Только специалист может оценить результаты обследования и сопоставить их с клинической картиной.

Однако, при всех достоинствах методика иммуноферментного анализа несовершенна и часто используется в сочетании с другими способами диагностики. Результаты анализа могут быть ложноположительными (часто наблюдается при наличии ревматологических и аутоиммунных болезней) и ложноотрицательными (при сильном иммунодефиците). Тогда диагностика инфекционных заболеваний переходит на молекулярный уровень. Про него расскажем ниже.

ПОЛИМЕРАЗНАЯ ЦЕПНАЯ РЕАКЦИЯ

Анализ под микроскопом ПЦР диагностика инфекций была создана в конце 20 века. Этот метод позволяет находить генетический материал возбудителя болезни даже в капле крови. Также можно исследовать мочу, мокроту, смывы из носоглотки и любые другие биологические объекты.

Какие возбудители чаще всего нуждаются в ПЦР-диагностике? В клинике полимеразную цепную реакцию используют для подтверждения диагноза СПИД, инфекционный гепатит, папилломавирус, хламидиоз, токсоплазмоз, микоплазмоз, уреаплазмоз. Но при желании с помощью ПЦР можно определить наличие любой инфекции.

Метод ПЦР бывает не только качественным, но и количественным (позволяет определить массивность инфекционных частиц). Это свойство широко используется при лечении вирусных гепатитов.

Расшифровка качественного анализа не требует медицинского образования.

Если ДНК (РНК) возбудителя обнаружена в крови (соскобе, моче и т.д.), то диагноз подтверждается. Количественный анализ трактуется только врачом. В целом метод быстр, прост и удобен. Цена на такой вид анализа остается приемлемой. Например, диагностика инфекционных гепатитов варьируется от 400-800 рублей, половые инфекции можно определить за 300-500 рублей.

Adblock detector