Окраска по папаниколау методика

Компания Биовитрум предлагает оборудование и расходные материалы для проведения Пап-теста (pap test) при различных заболеваниях в области гинекологии.

Метод применим для различного цитологического материала: гинекологического (мазки из цервикального канала) и не гинекологического (асцитическая, выпотная, плевральная жидкости и др.)

Чаще всего окраска по Папаниколау (PAP-тест ) используется в гинекологии в качестве замены метода окраски Азур-эозином по Романовскому. Окраска по Папаниколау является мировым стандартом в скрининге рака шейки матки, используется для выявления предраковых и фоновых заболеваний. Данный метод применяется так же для исследования клеток другого по происхождению цитологического материала. Метод окраски по Папаниколау позволяет оценить степень созревания цитоплазмы, хорошо окрашивает ядра с атипией. Образец для исследования может быть приготовлен как традиционным способом, так и методом жидкостной цитологии.

Артикул Номенклатура Описание
05-071 Папаниколау Гематоксилин Гарриса (1000 мл) пап тест Краситель для окрашивания ядер
05-071/S Папаниколау Гематоксилин Гарриса (500 мл) пап тест
05-070 Папаниколау OG6, 1000 мл Красители для дополнительного контрокрашивания цитоплазмы при проведении тестирования
05-070/S Папаниколау OG6, 500 мл
05-069 Папаниколау ЕА50 (1000 мл) Красители для специфической окраски цитоплазмы при проведении Пап теста
05-069/S Папаниколау ЕА50 (500 мл)

Преимущества метода окраски по Папаниколау

При проведении тестирования производится забор материала из всех областей шейки матки (эндо- и экзоцервикс) специальной щёточкой. После забора материала производится подготовка специального мазка-отпечатка, его окраска по методу Папаниколау.

Преимущество окраски по Папаниколау в том, что метод позволяет оценить степень зрелости цитоплазмы клеток, при этом хорошо выявляет ядра атипичных клеток. Методика позволяет диагностировать патологию на ранних стадиях, когда возможно практически 100% излечение.

В традиционной цитологии мазок готовится вручную. Такой мазок содержит не только клетки слизистой, но и элементы крови, слизь, возбудители (при их наличии), что может затруднять исследование и приводить к неправильной оценке результатов. Атипичные клетки, могут быть замаскированы наслоившимися клеточными элементами. Все эти недостатки обуславливают не очень высокую информативность традиционного теста.

Для исключения ошибок при подготовке мазков и их тест исследовании используется современное медицинское оборудование для проведения жидкостной цитологии.

Первое преимущество жидкостной цитологии – это усовершенствованная автоматизированная методика приготовления мазка. Забор материала производится цитощёточкой специальной конструкции, которая позволяет получить материал со всех областей шейки матки. Весь материал помещается в специальную виалу со стабилизатором, в которой хранится достаточно долгое время, и может повторно исследоваться, если это необходимо.

Для проведения жидкостной цитологии используется специальное оборудование, например технология BD SurePath™ и система BD FocalPoint, система NOVAPREP®NPS25, NPS50.

Для автоматизированной обработки материала и удаления лишних элементов (слизи, клеток крови) используется центрифуга Cyto-Tek®.

В настоящее время рак шейки матки занимает второе место по распространённости среди всех онкозаболеваний у женщин.

Значительное снижение смертности от рака шейки матки в средине 20-го века было связано с открытием Джорджа Папаниколау – он утверждал, что исследование влагалищных выделений может привести к обнаружению атипичных клеток из шейки матки. Через пару десятков лет пап тест получил признание врачей и начал распространяться по всему миру.

Читайте также:  Серая моча у ребенка

В чём же преимущество пап-теста, или цитологического мазка из шейки матки по Папаниколау? При проведении тестирования производится забор материала из всех областей шейки матки (эндо- и экзоцервикс) специальным шпателем или щёточкой. После забора материала производится подготовка специального мазка-отпечатка, его окраска по методу Папаниколау.

Преимущество окраски по Папаниколау – позволяет оценить степень зрелости цитоплазмы клеток, ядра атипичных клеток при этом прокрашиваются лучше. Проведение пап-теста позволяет обнаружить атипичные клетки даже в тех случаях, когда никаких проявлений онкологического заболевания ещё не видно. Рак шейки матки выявляется на ранних стадиях, что позволяет добиться практически 100% излечения этого страшного заболевания.

Несмотря на то, что методика проведения пап-теста была разработана много десятков лет назад, учёные постоянно ведут разработки по её усовершенствованию. Несмотря на свою значимость, пап тест имеет не очень высокую информативность – по разным данным от 40% до 60%. Связано это с необходимостью приготовления мазка вручную, что зачастую приводит к получению некачественых образцов. Кроме того, в мазок попадают все элементы выделений: не только клетки слизистой, но и элементы крови, слизь, возбудители (при их наличии), что может затруднять его исследование и приводить к неправильной оценке результатов.

В цитологический мазок при проведении традиционного пап-теста могут не попасть атипичные клетки, или они будут замаскированы наслоившимися клеточными элементами. Все эти недостатки и обуславливают не очень высокую информативность традиционного теста.

Для исключения ошибок при подготовке мазков и их исследовании теста было разработано современное медицинское оборудование для проведения жидкостной цитологии. Жидкостная цитология – это тот же пап тест , но более совершенный, обладающий практически 100% достоверностью.

Первое преимущество жидкостной цитологии – это усовершенствованная автоматизированная методика приготовления мазка. Забор материала на тест производится цитощёточкой специальной конструкции – она позволяет получить материал абсолютно со всех областей шейки матки.

ля дальнейшей работы потребуется инновационный цитологический процессор – типа NOVAPREP®NPS25, NPS50. Для получения мазков оператору требуется всего лишь загрузить материал в процессор.

В процессоре происходит автоматизированная обработка материала с удалением лишних элементов (слизи, клеток крови) в цитоцентрифуге (например, центрифуга Cyto-Tek®) , последующее нанесение клеточного материала в один слой на специальные стекла, высушивание и окраска мазков.

Качество теста

Современные процессоры при проведении пап-теста позволяют не только подготовить качественные мазки для исследования, но и проводят предварительную оценку мазков – для этого в память процессора загружается обширная база нормальных и изменённых клеток.

Если в мазке цитолог обнаруживает подозрительные по атипии клетки – он может произвести дополнительные исследования пап-теста без повторного забора материала: ведь весь материал хранится в специальной пробирке со стабилизатором достаточно длительное время. Можно произвести исследование на наличие папилломавируса или белка Р16ink4a – их обнаружение будет говорить о наличии онкопроцесса в шейке матки.

В ближайшие годы основным методом диагностики рака шейки матки будет оставаться традиционный пап-тест – ведь современное медицинское оборудование для проведения жидкостной цитологии стоит достаточно дорого, да и само исследование могут себе позволить не все женщины. Традиционный метод теста имеет недостатки, которые позволят жидкостной цитологии вскоре вытеснить его:

  • При проведении пап-теста в ся работа по приготовлению мазков производится вручную, что снижает качество препаратов, занимает много времени
  • Длительность исследования (обычно не менее двух недель) и загруженность персонала лаборатории
  • Достаточно часто получаются ложные результаты
Читайте также:  Железистый полип эндометрия секреторный вариант

Большой проспект Васильевского острова, д. 68, лит. А

А.В. Безруков, М.В. Кузнецов, ООО ЭМКО (Москва).

Окраска цитологических препаратов по Папаниколау [5,6] – общепризнанный метод, широко применяемый при скрининге рака шейки матки, в цитологической диагностике.

К сожалению, методика довольно сложна и многостадийна. В процессе подготовки препарата, клетки ткани подвергаются воздействию различных красок и технологических жидкостей, окраска структурных составляющих препарата – ядра и, в особенности, цитоплазмы, многократно изменяется. На первом этапе осуществляется окраска гематоксилином (квасцовым гематеином). (Мы будем рассматривать только прогрессивный вариант окраски, при котором процесс окраски прерывается во время прогрессирования – на стадии, когда ядра клеток не перекрашены, а цитоплазма почти не окрашена). Окраска в гематоксилине прерывается промывкой, затем следует отсинивание в щелочной среде. После отсинивания и промывки, следует окраска в первой цитоплазматической краске OG6 (на основе красителя оранжевый G), быстро прокрашивающей цитоплазму всех клеток. Далее, после промежуточной промывки, следует окраска в комбинированной краске «ЕА» (на основе красителей Эозин Y, светло-зеленый SF, и фосфорно-вольфрамовой или фосфорно-молибденовой кислоты), которая служит протравой и обеспечивает дифференциальную окраску цитоплазмы разных клеток в розовый и зелёный цвет [2, стр. 169]. После окраски в ЕА только кератинизированные клетки и чешуйки сохраняют жёлтый цвет, цитоплазма остальных клеток окрашивается в розовый и зелёный цвета. Заканчивается приготовление препарата промывками в ваннах со спиртом, просветлением и заключением под покровное стекло.

В некоторых работах, в частности, в [3, стр. 166, 169-171], смена цвета цитоплазмы при окраске по Папаниколау рассматривается, как процесс вытеснения одного красителя другим. Т.е. считается, что оранжевый краситель вытесняется эозином, в последующем эозин в части клеток вытесняется светло-зелёным SF. При микроспектрофотометрических исследованиях результат окрашивания рассматривается как результирующая вкладов от разных красителей [1,4]. Не отрицая возможности вытеснения молекул одного красителя молекулами другого, в работе сделана попытка экспериментально показать возможность формирования окраски структурных элементов препарата за счёт наложения результатов окрашивания разными красками (красителями).

Приборы, материалы и методики исследования.

Приборы. Исследования проводили с применением автоматов окраски мазков АФОМК-13-ПАП (13 станций, в том числе – ванна с проточной водой и две станции сушки), производства ООО ЭМКО (Россия, Москва). Морфологические исследования проводили на микроскопе MT4300L с цифровой камерой и светодиодным осветителем. Изображения, используемые для качественного сравнения результатов, фотографировались при идентичных условиях освещения, а в случае электронной обработки для публикации, подвергались идентичным преобразованиям.

Технологические жидкости. При отработке методик использовали краски и другие технологические жидкости собственного производства, компаний Биовитрум (Россия), Bio-Optica (Италия), Emmonia Biotech (Болгария), J.T. Baker (Голландия).

Читайте также:  Миома кровит что делать

Препараты. В качестве препаратов использовали мазки с клетками с внутренней поверхности щеки и с клетками эпителия твёрдого нёба. Клетки забирали щёточкой сначала с твёрдого нёба, затем – со щеки, наносили на стекло и немедленно погружали в ванну с этиловым спиртом на 15 мин.

Окраска. Основную часть экспериментов проводили с применением варианта прописи прогрессивной окраски по Папаниколау для автомата АФОМК-13-ПАП, «EMCO-PAP-16» [6] на основе «Enviro PAP» по Гиллу [3] (Таблица 1, Рис. 1).

Таблица 1 Протокол технологической программы окраски EMCO-PAP-16

Кат.№КПНVL

ДИАХИМ – ЦИТОСТЕЙН – ПАП
(окраска по Папаниколау)

Набор реагентов для окраски цитологических препаратов.

Описание товара

Набор реагентов для окраски по Папаниколау

Набор реагентов для окраски цитологических препаратов.

Принцип метода:
Ядра клеток избирательно окрашиваются гематоксилином, цитоплазма – смесью красителей в разные цвета в зависимости от типа клеток и их зрелости.

Состав набора:

  • гематоксилин по Гаррису – 1 фл (100 мл)
  • краситель Папаниколау — 1 фл (100 мл)
  • краситель оранжевыйG6 – 1 фл (100 мл)
  • литий углекислый –1 фл (3 мл)

Ход реакции:

Реактивы
Время

(мин)

Примечания 1. Фиксация 10-30 Необходимо погружение всего мазка 2. Промыть спиртом 1 Наливая на стекло и покачивая слить в отработанный. 3. Промыть водой 2-3 Первый стакан 4. Гематоксилин по Гаррису 2-8 Слить в тот же флакон через воронку с фильтром 5. Промыть в воде, оставить посинеть 5 Второй стакан. Контроль под микроскопом окраски ядер 6. Дифференцировать 0,5% раствором соляной кислоты 1 Покачивая до покраснения препарата, слить. 7. Промыть тщательно в воде 1 Третий стакан 8. Оставить в водопроводной воде до посинения препарата 2-5 Четвертый стакан.Контроль окраски ядер под микроскопом. 9. Опустить в раствор углекислого лития для посинения ядер (3 капли углекислого лития на 100 мл дистиллированной воды). Промыть в воде. 1-2 Четвертый стакан. Контроль под микроскопом окраски ядер 10. Тщательно обезводить спиртом 2 Наливая на стекло и сливая 96° этиловый спирт 11. Оранж G налить на стекло 1-3 Покачивать. Слить во флакон для отработанной окраски. Наливать на стекла, сливать до стекания чистых капель 12. Промыть этиловым спиртом 96 0 2 Контроль под микроскопом 13. Окрасить красителем Папаниколау 2-10 Покачивать. Сливать во флакон для отработанной краски 14. Промыть этиловым спиртом 96 0 1-3 Контроль под микроскопом влажного препарата 15. Промакнуть фильтровальной бумагой 2 16. Ксилол 3 Быстро. Покачивать до просветления препарата. Слить во флакон для отработанного ксилола 17. Бальзам, покровное стекло Удалить пузырьки воздуха.

Результаты окраски:
Ядра клеток – сине-фиолетового цвета, с четкой структурой хроматина, при которой заметны краевой гиперхроматоз, пикноз, лизис и ядрышки. Цитоплазма окрашена контрастно: при базофилии – в зеленый цвет различной интенсивности, определяемой плотностью цитоплазмы; при ацидофилии – от бледно-желтого до ярко-оранжевого у зрелых клеток. В случае неполного ороговения цитоплазмы возможна окраска части ее в зеленые тона, другой части — в оранжевые.

Adblock detector