Гистология как проводится

Содержание

Гистологическое исследование биопсийного материала — один из основных методов лабораторной диагностики новообразований. Это высокоточный способ, позволяющий оценить состояние и структуру клеток, поставить верный диагноз и проконтролировать эффективность терапии.

Что собой представляет гистологическое исследование

Гистологическое исследование — это изучение клеток биоптата (образца пораженной ткани) под микроскопом. Звучит достаточно просто, однако на самом деле метод этот довольно сложный, он предполагает различные технологии обработки биоматериала и различные способы микроскопии.

Биоматериалом для гистологического исследования могут быть образцы различных тканей — кожи, слизистых оболочек, мышц. Иногда гистологическому исследованию подвергается мазок — клетки эпителия, снятые при помощи специальной мягкой щеточки.

Методы проведения анализа

Методы гистологического исследования различаются по способу микроскопии. Выбор обычно определяется целями исследования: нужно ли качественное или количественное определение, выявление химического состава или внешних патологий структур…

Среди применяемых подходов можно выделить следующие методы микроскопии:

  • Световая — просвечивание в видимой части спектра.
  • Фазово-контрастная , позволяющая изучать клетки без окрашивания. Разновидностью этого метода является темнопольная микроскопия, дающая негативное изображение.
  • Интерференционная микроскопия, которая дает возможность определять концентрацию вещества в клетке и проводить количественные морфологические измерения.
  • Поляризационная , позволяющая определять характер расположения молекул в клетке.
  • Люминесцентная (флуоресцентная) , при которой клетки окрашиваются специальными красителями, заставляющими их светиться во флуоресцентном освещении.
  • Ультрафиолетовая — просвечивание в ультрафиолетовой части спектра.
  • Электронная , при которой для просвечивания используется не свет, а направленный пучок электронов.
  • Радиоавтография — исследование, предполагающее использование изотопных меток, позволяет оценить скорость обменных процессов в клетке.
  • Цитоспектрофотометрия — изучение химического состава клетки [1] .

Показания к назначению исследования

Когда показано проведение гистологического исследования? Этот метод диагностики используется во многих областях медицины. Особенно ценен этот метод при изучении новообразований — он позволяет определить их характер (доброкачественный или злокачественный), скорость роста, результативность терапии. Гистологические исследования широко используются в таких разделах медицины, как гастроэнтерология, оториноларингология, гинекология, урология, гематология, пульмонология, нефрология и других. Гистологическое исследование обязательно назначается при подозрении на опухоль, а также для определения стадии процесса. Его проводят перед назначением противоопухолевой терапии и во время лечения для контроля его эффективности (а также при необходимости — его коррекции).

Противопоказаний у метода практически нет — главное, чтобы была возможность взять биоптат. Ограничениями для проведения гистологического исследования могут стать нарушения свертываемости крови и аллергия на анестетики (эти факторы не позволят провести биопсию), тромбоцитопения, риск прерывания беременности, если исследование проводят женщине, ожидающей ребенка, а также некоторые заболевания, в частности, сердечная недостаточность [2] .

Как проводится гистологическое исследование: этапы процедуры

Гистологическое исследование подразделяется на несколько этапов.

Подготовка к исследованию

Зависит от способа и локализации места забора биоптата. Обычно эту процедуру проводят утром. Желательно проводить ее натощак, поскольку нередко биопсия предполагает местный наркоз или седацию. Поэтому последний прием пищи должен состояться за 8 часов до процедуры или раньше.

Взятие материала для гистологического исследования (биопсия)

Забор биоптата может производиться различными способами.

  • Во время хирургической операции (так называемая инцизионная биопсия ) врач берет образец пораженной ткани.
  • Щипковая биопсия — забор частички материала специальными щипчиками, которые нередко вводятся эндоскопическим методом.
  • Пункционная биопсия предполагает забор материала толстой иглой. Часто используется для получения образца клеток из печени и простаты.
  • Аспирационная биопсия — образец тканей получают при помощи отсасывания маленькой трубкой, этот способ используют для биопсии миоматозных узлов, узлов щитовидной железы и пр.
  • Эксцизионная биопсия — хирургическое удаление пораженных органов и тканей и их последующее исследование.
  • Трепан-биопсия применяется для забора жидкостей из костной ткани.
  • Кюретаж — соскабливание небольшого количества ткани из полости при помощи специальной ложечки-кюреты с острыми краями.
  • Мазок — забор клеток слизистых оболочек тонкой щеткой, похожей на щетку туши для глаз.

Забор биоптата — безопасная процедура, которая проводится под контролем УЗИ, риска повреждения органов нет.

Исследование материала

В современной медицине используются два способа проведения гистологического исследования.

При обычном способе полученный биоптат обрабатывают фиксирующим веществом, которое не дает ему распадаться под воздействием ферментов, и уплотняют, заливая парафином. Затем полученный препарат нарезают микротомом на «ломтики» толщиной не более 8 мкм и окрашивают. После этого препарат изучают при помощи микроскопа и выносят заключение. Обычно результаты готовы через 7–10 дней. Дольше всего приходится ждать результатов обследования биоптата костной ткани — около 2 недель.

Однако иногда результаты гистологического исследования нужны врачу немедленно, в течение часа — например, при проведении операции, когда встает вопрос о немедленном удалении или сохранении органа. В этом случае применяется ускоренная методика гистологического исследования, при которой биоптат замораживают, режут микротомом и сразу проводят микроскопию. Исследование занимает всего час или менее [3] .

Что показывает гистологическое исследование: принципы трактовки результатов

Гистологическое исследование — очень точный метод лабораторной диагностики. Ошибки крайне редки и вызваны в основном нарушением технологии при заборе биоматериала.

Как расшифровать результаты гистологического исследования? Сразу стоит оговориться, что результат, который выдается пациенту на руки, — медицинский документ, и только врач может интерпретировать его. Мы приводим лишь общую информацию об этом документе. Не пытайтесь на ее основании самостоятельно поставить себе диагноз и тем более назначить лечение.

В бланке результатов гистологического исследования всегда указывается имя пациента и его данные, дата и место забора биоматериала, тип исследованных тканей, способ исследования и растворы и препараты, которые применялись во время подготовки образца тканей.

Пациентов нередко тревожит объем заключения гистологического исследования. Обычно в заключении перечисляется огромное количество названий тканей, однако это еще не значит, что исследование обнаружило массу патологий. По правилам заключения специалист описывает вообще все типы тканей, обнаруженных в биоптате, даже если они совершенно здоровы.

Каждый тип тканей оценивается по нескольким параметрам — цвет, консистенция и плотность, наличие изменений, не вписывающихся в норму (таких, как прорастание, размягчение и пр.).

Стоимость исследования

Несмотря на всю сложность, гистологическое исследование стоит относительно недорого. В муниципальных медучреждениях при наличии полиса его делают бесплатно. Однако государственные лаборатории часто перегружены, и пациенту порой приходится долго ждать направления на биопсию и результатов анализа. Поэтому некоторые предпочитают заплатить из собственного кармана, но пройти исследование быстро. В коммерческих лабораториях стоимость гистологического исследования составляет около 3000–4000 рублей. Стоимость биопсии как таковой начинается от 1500–2000 рублей и может доходить до 8000 рублей в зависимости от сложности, способа проведения и типа биоматериала.

Гистологическое исследование требует строжайшего соблюдения технологии забора биоптата, его упаковки и перевозки. Это особенно важно, если транспортировка биоматериала от места забора до лаборатории будет долгой. Поэтому желательно, чтобы забор и исследование материала проходили в одном и том же месте (если есть такая возможность), в лаборатории, оснащенной самым современным оборудованием.

Тканевый состав той или иной части матки, ее шейки, играет важную роль в диагностике различных заболеваний, как связанных, так и не связанных с новообразованиями в органах репродуктивной системы. По этой причине различные исследования клеточного состава тканей играют в гинекологии такую важную роль. Именно к таким исследованиям относится гистология матки, которая проводится при различных симптомах, и бывает информативна при диагностике различных типов заболеваний.

Читайте также:  Простатилен цинк уколы

Определение

Гистологическое исследование эндометрия и матки – изучение морфологического клеточного строения тех или иных тканевых образований измененного (или предположительно измененного) органа с целью установления типа патологического процесса. В ситуации, когда речь идет об исследовании репродуктивной системы, принципиальное отличие от мазка на цитологию, который также рассматривает клеточный состав, в том, что при цитологии берется только соскоб верхнего слоя слизистой, тогда как при гистологии – непосредственно кусочек ткани (то есть, процедура более травматичная).

Ее проводят пациенткам любого возраста при наличии к этому достаточных показаний. В отличие от цитологии, гистология не проводится в целях профилактики, планово. Препаратом для изучения служит фрагмент ткани части органа, содержащий в себе несколько клеточных слоев, клетки разного типа.

Его исследование проводится использованием специальных растворов и красителей, в лабораторных условиях.

Показания

В каких же случаях гистология шейки матки необходима? Для назначения этого метода имеются следующие показания:

  • Бесплодие;
  • Нарушения менструального цикла, отсутствие менструаций;
  • Боли в животе;
  • Боли и дискомфорт при половом акте;
  • Чрезмерно болезненный предменструальный синдром;
  • Нехарактерные или специфические выделения из влагалища;
  • Кровотечения вне менструального цикла и т. п.

Причем, так как метод достаточно травматичный, он назначается только в тех случаях, когда все остальные способы диагностики оказались неинформативными, не помогли выявить заболевание или же между их результатами есть значительные противоречия. В любом случае назначается анализ на гистологию шейки матки при следующих состояниях: лейкоплакия, неровная поверхность цервикального канала по неустановленным причинам, большое количество злокачественных атипичных клеток в мазке на цитологию и др.

Противопоказания

Хотя очень часто гистология эндометрия матки изучается, в том числе, и по жизненным показаниям, в некоторых состояниях такой анализ проводить нельзя. Его рекомендуют отложить, если:

  1. Пациентка беременна;
  2. Пациентка имеет очень низкую свертываемость крови;
  3. Идет острый воспалительный процесс в органах репродуктивной системы, так как создается высокий риск инфицирования;
  4. У пациентки идут месячные в день предполагаемого проведения процедуры.

Пренебрежение данными противопоказаниями может привести к тому, что разовьется кровотечение и/или воспалительный процесс. Также может образоваться большой рубец, который негативно повлияет на растяжимость родовых путей, а следовательно, осложнит родовой процесс в дальнейшем. Повреждение опухолевого образования может привести к тому, что оно будет активно расти.

Приготовления к процедуре

При приготовлении к этой процедуре нужно пройти следующие исследования:

  1. Анализ крови на заболевания, предающиеся половым путем;
  2. Исследование на степень чистоты влагалища;
  3. Цитологическое исследование, бактериологию, ПЦР;
  4. На протяжении 48 часов до вмешательства нельзя вступать в половой контакт;
  5. В течение этого же времени нельзя применять тампоны, спринцевания, вагинальные свечи, гели, кремы и т. д.;
  6. По согласованию с лечащим врачом стоит прервать прием антикоагулянтов и гормональных средств.

Правильные и полные подготовительные мероприятия перед вмешательством очень важны, так как значительно влияют на информативность и объективность полученных в ходе анализа данных.

В какой день сдавать?

Стадия менструального цикла, в которую берется анализ на гистологию шейки, зависит от того, с какой целью проводится исследование. При определении тех или иных показателей лучше выбирать тот или иной день для проведения этого исследования.

  • Для диагностики меноррагии материал для исследования рекомендуется забирать не позднее, чем за 48 и не ранее чем за 72 часа до предполагаемого начала месячных;
  • При выяснении причин бесплодия этот срок увеличивается до 5-7 суток;
  • Если необходимо оценить гормональный статус по результатам соскоба, то его лучше делать в третьей стадии менструального цикла, так как именно в этот период его результаты наиболее объективны и информативны (с 17 по 25 день цикла);
  • Если имеет место аменорея, то анализы принято брать несколько раз – четыре раза с недельным перерывом между ними (обычно, используются малотравматичные методы);
  • Если необходима диагностика при наличии каких-либо опухолей, то результаты гистологии шейки матки одинаково информативны вне зависимости от того, в какой период они сдавались.

Могут иметься и некоторые другие особенности. Именно поэтому очень важно сдавать гистологический анализ именно тогда, когда его назначил врач. Если же он назначен срочно, то при расшифровке специалист должен делать поправку на то, в какую стадию менструального цикла проводилось исследование.

Методы сбора

Материал из полости матки может забираться различными способами. Обычно, чаще всего используются 8 из них. Одни более травматичные, другие – менее. Наиболее подходящий способ подбирает врач, основываясь на индивидуальных особенностях организма пациентки. Наиболее популярны следующие способы:

  • Радиоволновая биопсия проводится с задействованием аппарата Сургитрон. Фрагмент органа отсекается с помощью радиоволнового скальпеля;
  • Клиновидная или холодно-ножевая биопсия выполняется простым металлическим скальпелем. В ходе нее удаляется треугольный участок ткани;
  • Эндоцервикальный кюретаж осуществляется с помощью кюретки – особой хирургической ложки. Ткани соскабливаются ею, а затем извлекаются;
  • Петлевой забор материала выполняется разогретой высокочастотным током металлической петлей. Ею отсекается часть органа, которая в дальнейшем изучается;
  • Лазерный метод предполагает задействование лазерного ножа. Это достаточно инновационный способ, требующий дорогостоящего оборудования, как и радиоволновой;
  • Конхотомная биопсия выполняется с применением конхотома – особых хирургических ножниц-щипцов, которыми отсекается и извлекается участок фрагмент материала;
  • Прицельный забор – это не способ осуществления процедуры, а скорее подход к ней. При таком исследовании удаляется именно тот участок тканей, который вызывает подозрение;

К наименее травматичным методам относятся лазерный и радиоволновой. Именно их чаще всего назначают молодым девушкам. Наиболее простые и дешевые, а также травматичные способы – это те, в ходе которых используется простой скальпель или петля. Таким методом процедуру проводят, обычно, бесплатно, по полису обязательного медицинского страхования.

Ход исследования

После того, как препарат был забран на исследование, его обрабатывают консервантом, а также красящими составами для упрощения диагностики. Воду из препарата удаляется, что также делает его более долговечным, а его морфологию оценить проще.

Плотный блок ткани изготавливается с помощью парафина. Затем особым прибором под микроскопом проводится тонкий срез ткани. Материал окрашивается по срезу тем или иным образом. После этого срез ткани осматривается под микроскопом. В норме эпителий коричневый, клетки примерно одинаковые. Если имеются отклонения, это позволяет предположить наличие того или иного заболевания.

Особенности

Всем, сдающим данный анализ, нужно учитывать, что хотя гистологическое исследование шейки матки – это достаточно часто проводящаяся процедура, которая назначается более или менее регулярно, она, тем не менее, сложна. Потому важную роль в ее информативности и качестве результата играет профессионализм специалиста, который ее выполняет. Особенно это касается наиболее инновационных методов работы, в которых у врачей еще нет достаточного (по сравнению со старыми методами) опыта.

Кроме того, очень важна качественная подготовка к такому анализу со стороны пациентки. Все рекомендации должны выполняться в полном объеме. Только тогда результат теста будет максимально эффективным.

Длительность изготовления

Сколько делается такой анализ? Время изготовления различно и зависит от многих параметров. Это и загруженность лаборатории, и особенности методов, которыми исследуется материал, и цели исследования, и особенности препарата и т. д. но в среднем результаты исследования можно получить через 3-7 дней после сдачи.

Читайте также:  Сколько нельзя секса после родов

Расшифровка

Как расшифровать результаты? Сделать это грамотно может только врач. Удается установить, носит ли атипия лишь фоновый характер, либо она затрагивает глубинные слои тканей и атипичные клетки присутствуют не только на слизистой, но и в более глубоких слоях. Если атипичные клетки обнаружены в глубинных слоях тканей, то это дает возможность предположить или подтвердить наличие инвазивного рака – наиболее тяжелой формы онкологии.

Бывают ли ошибки?

Может ли плохая биопсия быть ошибочной? Ошибочной чаще бывает как раз хорошая биопсия, когда вследствие ошибки забора ткани или ее исследования атипичные клетки не обнаруживаются, хотя на самом деле они есть. В целом же, если приготовления и техника забора и изучения были соблюдены, то вероятность ошибки очень низкая.

Восстановительный период

С учетом того, каким методом проводился сбор тканей для изучения, может быть разный по длительности восстановительный период. Обычно, рекомендуется соблюдать перечисленные ниже ограничения в течение трех – шести недель после вмешательство. Минимальный показатель рекомендован при малотравматичных вмешательствах, максимальный – при достаточно травматичных. Какие же ограничения специалисты рекомендуют соблюдать на протяжении этого срока?

  1. В течение 5-7 дней не поднимать тяжести и ограничить физические нагрузки;
  2. В течение 3 дн6ей лучше избегать попадания во влагалище воды;
  3. На протяжении всего восстановительного периода нельзя купаться в природных водоемах, хлорированных общественных бассейнах, так как есть риск занесения инфекции;
  4. Не стоит париться в саунах, загорать, посещать солярий также на протяжении всего восстановительного периода;
  5. Снова начинать половую жизнь можно не ранее, чем через месяц после вмешательства, вне зависимости от его типа.

В норме, когда проводится такое вмешательство, на протяжении недели могут наблюдаться незначительные кровянистые выделения из влагалища и легкие тянущие боли внизу живота. Это нормальное состояние. Однако, если боли становятся слишком интенсивными, выделения становятся нехарактерными – меняют запах и цвет, имеется сильное кровотечение, то необходимо незамедлительно обратиться к врачу. Тоже самое нужно сделать, если отмечается повышенная температура тела.

Стоимость

Стоимость исследования различается в разных городах.

Город Медцентр Стоимость, руб.
Москва Гемотест 6200
Санкт — Петербург Университетская клиника 2500
Екатеринбург Екатеринбургский медицинский центр 2000

Цены указаны ориентировочные и могут быть увеличены за счет стоимости материалов и препаратов.

Заключение

Хотя анализ на гистологию достаточно травматичный, он, тем не менее, необходим. И своевременно выполненный он может даже косвенно поспособствовать спасению жизни пациентки.

Злокачественные новообразования — это группа заболеваний, насчитывающая несколько тысяч видов опухолей разных типов и разной степени злокачественности. Они подразделяются на большие группы в зависимости от того из каких тканей они развиваются: если из эпителиальных (барьерных) — то это раки, если из соединительных тканей (мягких тканей и костей) – саркомы, если из лимфоидных (иммунных) – лимфомы/лейкозы. От того насколько правильно верифицирована опухоль (определен ее тип, степень злокачественности и другие характеристики) зависит правильность и эффективность лечения. Важную роль в этом играют гистологические исследования.

О том, как проходят гистологические исследования, какие задачи кроме диагностических они позволяют решать, что влияет на сроки их выполнения рассказывает заведующая патологоанатомическим отделением с прозектурой НМИЦ онкологии им. Н.Н. Петрова, к.м.н. Анна Сергеевна Артемьева.

Что служит материалом для патоморфологических (гистологических) исследований?

Процесс получения фрагмента ткани (биоптата) — биопсия – это несколько разных способов забора материала для гистологического исследования.

  • Пункционная биопсия – «тычок», тонкой или толстой иглой. Пункционные биоптаты редко имеют диаметр больше 1-2 мм.
  • Ножевая биопсия – открытая или эндоскопическая (малоинвазивная), в том числе лапароторако-медиастиноскопия.

Биопсию внутренних органов делают под УЗИ-навигацией, либо с помощью хирургического вмешательства.

Как обрабатывают эти материалы для проведения гистологического исследования?

1 Этап. Фиксация — «консервирование» биоптата в формалине — специальном химическом растворе, который предотвращает гниение, позволяет сохранить структуры ткани.

Фиксация биоптата может занимать от 6 до 24 часов – в зависимости от его вида и размера.

Операционный материал фиксируется дольше, в несколько этапов. Сначала предварительная фиксация, которая занимает примерно 12 часов. Затем вырезка нужных фрагментов и повторная фиксация еще 24 часа.

Соотношение объема материала к объему формалина должно быть 1:20.

2 Этап. Процессинг — процесс обезвоживания, обезжиривания и пропитки материала парафином. Автомат перемещает кусочек материала из раствора в раствор.

В качестве растворов применяются: абсолютированный изопропиловый спирт (6-8 смен), ксилол (2 смены), расплавленный парафин (2 смены).

Программа разнится для «жирного» материала (к которым относятся, например, ткани молочной железы) и «нежирного» – 36 и 24 часа соответственно.

Процесс получения парафиновых блоков.

3 Этап. Изготовление парафинового блока. Кусок материала помещается в форму с расплавленным парафином (уже другим нежели во время процессинга – с более высокой температурой плавления) и охлаждается. Выполняется вручную, сложно ускорить.

4 Этап. Изготовление срезов. Толщина образца — кусочка ткани, залитого в парафин – 1-3 мм. Толщина каждого среза 4-5 мкм (0,004-0,005 мм). Выполняет лаборант с использованием специального инструмента – микротома.

Срезы монтируются на стекла и должны высохнуть.

Несмотря на то, что часть материала теряется при выравнивании в микротоме, при должном профессионализме, из одного образца — материала от одной биопсии, операционного материала от одной опухоли, возможно изготовить около 100 стекол (микропрепаратов).

Для чего делаются срезы?

Срезы делаются для рутинной окраски гематоксилинном и эозином, иммуногистохимического исследования и других видов исследований.

Срезы для всех исследований используются одинаковые, различается окраска, могут отличаться стекла, на которые они монтируются, так для ИГХ и FISH нужны специальные адгезивные стекла или заряженные стекла.

Блоки и стекла способны храниться долгие годы и использоваться для проведения дополнительных гистологических исследований, пересмотров, а также в научных целях.

Архив гистологических материалов собирается в НМИЦ онкологии им. Н.Н. Петрова с 1927 года и содержит более 10 млн единиц хранения (микропрепараты — стекла, парафиновые блоки, архивные карточки, влажный архив).

Какие виды гистологических исследований наиболее информативны?

  • Гистологическое исследование
  • Иммуногистохимия (ИГХ)
  • Флуоресцентная гибридизация in situ (FISH), может быть хромофобной (принцип тот же, другой тип метки)

Что позволяют определить разные виды гистологических исследований

Гистологическое исследование – что это такое?

Позволяет верифицировать опухоль – то есть определить из каких клеток она состоит (из какой ткани она развивается), степень ее дифференцировки (зрелости).

Рутинная окраска, выполняющаяся при гистологическом исследовании, позволяет выявить патологический процесс в анализируемом материале (биоптате, операционном материале):

  • воспаление,
  • специфическое воспаление,
  • аномалия развития,
  • опухоль.

Также, в большинстве случаев, благодаря рутинной окраске, можно определить степень злокачественности опухоли и, если она достаточно зрелая, то какова ее природа.

Окрашенные срезы под микроскопом

Инвазивный протоковый рак er 100%.

Карцинома сигмовидной кишки.

Крупноклеточная нейроэндокринная опухоль.

МТС крупноклеточной нейроэндокринной опухоли.

Неспецифический рак молочной железы. Участок in situ карциномы внутри протока, криброзного типа.

Низкодифферинцированный рак пищевода.

При гистологическом исследовании биоптата и операционного материала можно оценить распространенность: размер опухоли и прорастание в окружающие ткани, насколько затронуты лимфоузлы и есть ли метастазы в отдаленные органы (если эти все структуры присланы для гистологического исследования). При консультации готовых микропрепаратов – стекол, это, как правило, невозможно, если опухоль больше размеров гистологической кассеты или рассечена предыдущим исследователем и не предоставлены данные макроскопического исследования.

Во время гистологического исследования изучаются все стекла от одного образца – материала, полученного от одного вмешательства — одной операции или одной биопсии, вне зависимости от их количества, это считается одной консультацией.

Сроки выполнения гистологического исследования зависят от количества микропрепаратов и от категории сложности того процесса, который в них обнаруживается, сроки могут удлиняться, особенно при необходимости использования дополнительных методов исследования и анализа дополнительных сведений. На сроки выполнения гистологического исследования влияет полнота предоставленной пациентом клинической информации, в том числе данных уже проведенных исследований.

Читайте также:  Герпес на головке

Иммуногистохимия (ИГХ)

Сложное многоэтапное исследование, выполняется после гистологического исследования на том же материале. Опухолевые срезы окрашиваются антителами, которые способны связываться антигенами (белками), которые несут опухолевые клетки. Разные опухолевые клетки несут разные антигены, к каждому из которых подобно ключа к замку подходит антитело.

Один из этапов ИГХ

ИГХ исследование — это комбинаторика. 100% специфичных и чувствительных к какой-то опухоли маркеров не существует, но есть набор антигенов, которые в определенном типе опухоль должны быть и набор тех, которых там быть не должно, таким образом ИГХ-панель строится так чтобы включать несколько антител, которые должны быть позитивны и несколько, которые должны быть негативны. Для разных опухолей различаются эти наборы позитивных/негативных маркеров.

При проведении прогностической ИГХ – выявлении маркеров чувствительности к терапии определяется набор таких маркеров для конкретных опухолей, например, рака молочной железы: рецепторы стероидных гормонов (эстроген, прогестерон), рецептор эпидермального фактора роста (HER2) и индекс пролиферативной активности Ki67 (скорости деления клеток).

Стекла окрашиваются последовательно — различными антителами красятся наборы маркеров в несколько этапов, процесс окраски стекол одним антителом занимает 48 часов.

Таким образом, каждое антитело наносится на отдельный срез ткани, монтированный на отдельное стекло, как правило с соответствующим внешним контролем, количество реакций (используемых антител) и этапов окраски может существенно варьировать в зависимости от конкретной диагностической ситуации, все зависит от индивидуальных особенностей опухоли. Проводится такое количество окрасок, которое необходимо для того, чтобы выявить наиболее характерный для определенной опухоли набор позитивных и негативных маркеров.

Кому-то для этого будет достаточно 5 антител, а кому-то необходимо сделать 20 окрасок и более. Максимальное количество окрасок, которое нам приходилось делать – 212.

Поэтому точные сроки и стоимость этого исследования невозможно определить заранее. Разные по течению и прогнозу опухоли могут быть очень похожи друг на друга, только минимальные различия в окрашивании, с учетом клинических данных и данных других методов обследования, могут позволить установить верный диагноз.

Есть целый ряд доброкачественных опухолей, симулирующих злокачественные, в том числе высокоагрессивные, а некоторые злокачественные высоко дифференцированные опухоли трудно отличить от воспалительных и реактивных процессов. В таких ситуациях только опыт и квалификация патоморфолога, анализ всего комплекса доступной информации (снимки КТ, МРТ, рентген, протокол операции, и др.) позволяют поставить диагноз.

В грамотной интерпретации результатов ИГХ очень важна роль эксперта, ведь те случаи, с которыми приходится работать, в большинстве своем, сложные. Практически не существует антител, которые могут выступать в качестве 100%-х маркеров той или иной опухоли, врачу всегда приходится взвешивать различные вероятности.

Что определяется с помощью ИГХ?

  • Наличие рецепторов гормонов прогестерона и эстрогена при раке молочной железы;
  • Экспрессию HER-2/neu в клетках при раке молочной железы, раке желудка;
  • Определить ходжкинские и неходжкинские лимфомы — установить точный диагноз лимфомы на сегодняшний день невозможно без применения этого вида исследования.
  • Определить первичная это опухоль или метастазы, тканевую принадлежность метастазов.

Иммуногистохимия позволяет оценить потенциальный темп роста опухоли, ответ на химио-, таргетную, гормональную терапию.

Флуоресцентная гибридизация in situ (FISH-тест)

Это метод молекулярно-генетической диагностики в ткани.

FISH проводится в срезе ткани и позволяет привязать генетическую перестройку к конкретной опухолевой клетке.

В этом тесте также используются специальные красители, которые связываются только с определенными участками хромосом. Их называют зондами, которые могут быть помечены флуоресцентным или хромогенным красителем, визуализирующимися при помощи флуоресцентного или светового микроскопа.

Технические операции по подготовке гистологических стекол к этому исследованию занимает 2 рабочих дня.

Анализ препарата с помощью многоголового микроскопа.

Полученные микропрепараты очень чувствительны к внешней среде – они могут выцвести со временем, чтобы избежать потерь информации все FISH-препараты сканируются, создается их цифровая копия, которая доступна для внешнего пересмотра. Специалисты просматривают флуоресцирующий материал в темном поле, в анализе препарата принимают участие как минимум 2 специалиста. При необходимости используется и цифровой анализ.

Что определяется с помощью FISH-теста?

FISH-тест позволят диагностировать некоторые виды опухолей, определяет целесообразность использования некоторых химиотерапевтических препаратов.

  • определяется наличие амплификации HER2 в случаях пограничного результата по данным ИГХ, что необходимо для назначения таргетной терапии;
  • проводится диагностика, то есть выявление генетических перестроек специфичных для определенного типа опухолей, когда невозможно окончательно установить диагноз при помощи более простых методик, чаще всего это саркомы мягких тканей и опухоли головного мозга;
  • генетические отклонения, вызывающие рак того или иного органа;
  • при лимфомах эта методика используется в диагностических целях и для выявления факторов неблагоприятного прогноза, то есть показаний для ранней интенсификации лечения.

Проведение гистологического исследования, и в первую очередь FISH-теста — это экспертная работа, которая зависит от квалификации специалиста. Очень многие мутации, которые выявляются в опухолях, не всегда являются метками опухолей, они могут находиться и в доброкачественных образованиях или нормальных тканях.

За год патологоанатомическое отделение НМИЦ онкологии имени Н.Н. Петрова выполняет около 20000 гистологических исследований (пациентов), из них около 5000 консультативных случаев (пересмотров), более 30000 ИГХ исследований, а также участвует в программе внешнего контроля качества ИГХ исследований NordIQ.

Специалисты отделения обладают огромным опытом проведения гистологических исследований и экспертными компетенциями.

Скорость выполнения гистологических исследований и адекватность гистологического заключения зависят от ряда факторов:

  • Качества стекол и блоков;
  • Комплектности предоставления стекол (необходимо предоставить все стекла и блоки);
  • Предоставление пациентом дополнительной информации, которая поможет верно интерпретировать данные гистологического исследования, ИГХ и FISH-теста, а именно: данные анамнеза заболевания, данные о сопутствующих заболеваниях, в первую очередь инфекционных (ВИЧ, гепатиты); все данные всех проведенных обследований и вмешательств: снимки — рентген, КТ, МРТ, УЗИ, протоколы операций, выписки.

После выполнения гистологического исследования пациент получает гистологическое заключение/протокол исследования гистологического материала.

Расшифровка гистологического исследования: на что обратить внимание?

Гистологическое заключение включает в себя несколько рубрик (полей):

Макроскопическое описание

Заполняется как для биоптатов — не обязательно, так и для операционного материала, для которого имеет крайне важное значение в ряде случаев.

Микроскопическое описание

Описание изменений на микроскопическом уровне, не обязательно к заполнению, так как вся необходимая информация может быть отражена в поле «заключение».

Результаты иммуногистохимического исследования

В этом поле описано какие антитела использовались в данном случае и каков результат окрашивания: наличие окрашивание или его отсутствие, локализация в клетке при необходимости, а также процент позитивных клеток и интенсивность реакции, когда это имеет значение.

Патологоанатомическое заключение

Содержит нозологическую/классификационную единицу, если ее возможно установить по исследованному материалу, то есть дает ответы на вопросы:

  • Это первичная опухоль или метастаз?
  • Где локализован первичный опухолевый очаг?
  • Каков гистологический тип опухоли (из клеток какого типа она состоит).

Также приводятся все необходимые прогностические данные: степень дифференцировки, параметры, влияющие на стадию, состояние краев резекции, если возможно их оценить и т.п.

Дополнительные замечания и рекомендации

Поле может содержать комментарии, относительно возможного направления дальнейшего обследования, вероятности того или иного диагноза, необходимости ознакомиться с теми или иными клиническими данными и др.

Мы не рекомендуем пациентам самостоятельно заниматься расшифровкой показателей гистологического исследования, используя информацию, полученную на различных Интернет-сайтах и форумах пациентов, так как на интерпретацию данных влияет большое количество факторов, в том числе, возраст пациента, данные других исследований и др.

Расшифровкой исследования может заниматься только специалист – врач онколог по профилю заболевания!

Авторская публикация:
АРТЕМЬЕВА АННА СЕРГЕЕВНА
заведующий патологоанатомического отделения с прозектурой ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Петрова» Минздрава России, кандидат медицинских наук

Adblock detector